細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術,在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術。細胞培養(yǎng)技術可以由一個細胞經過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,這是克隆技術必須 的環(huán)節(jié),而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。接下來了解在培養(yǎng)細胞的實驗中常有的幾種試劑:
1、高糖DMEM溶液: 用新配制的三蒸水配制,高糖DMEM干粉(規(guī)格10×1L),溶入約總量的1/3的三蒸水,并用水洗凈包裝袋,在磁力攪拌器上攪拌30分鐘,加入NaHCO2 3.75克,補加水至最終量。用1N HCL調整PH為7.2,0.22μm濾膜抽濾除菌,分裝-20℃保存,使用時加10%的胎牛血清及雙抗溶液(最終濃度:青霉素100U/ml,鏈霉素 100μg/ml)
2、 胎牛血清: 使用前56℃水浴30分鐘滅活,無菌條件下分裝成10ml包裝,-20℃保存。用時以10%濃度注入培養(yǎng)液中。
3、 青霉素、鏈霉素雙抗溶液 青霉素100萬單位及硫酸鏈霉素1g無菌條件下溶于消毒三蒸水10ml,分裝,-20℃保存。使用時每1000ml培養(yǎng)液加入青、鏈霉素混合液1ml,最終濃度為青霉素100單位/ml,鏈霉素100μg/ml。
4、磷酸鹽溶液(PBS): NaCl 8g, KCl 0.4g, NaHPO4.H2O 1.15g KH2PO4 0.2g 分別溶于1000ml三蒸水中,調節(jié)PH值至7.4高壓蒸氣滅菌,分裝后4℃保存。
5、胰蛋白酶溶液: 用三蒸水制備成0.25%濃度,0.22μm濾膜抽濾除菌,4℃保存。
6、0.1%明膠溶液: 稱取明膠粉劑0.1g于燒杯中,加入三蒸水100mL于50℃充分攪拌至其完全溶解,0.22μm濾膜抽濾除菌,4℃保存。