ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。
ELISA步驟：免疫識(shí)別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識(shí)別待測(cè)的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物，病毒，細(xì)菌等等，從復(fù)雜待測(cè)液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（Horseradish Peroxidase, HRP）、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識(shí)別信號(hào)。最后利用信號(hào)強(qiáng)度，標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度梯度等信息計(jì)算得出待測(cè)樣中目標(biāo)抗原的濃度。
ELISA 法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為 ELISA 法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本, 因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。
ELISA 試劑盒基本原理：
1、抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
2、抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
由于 ELISA 法一方面是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上，因而，具有特異性。而另一方面又由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA 法是一種既敏感又特異的方法。
ELISA 試劑盒的質(zhì)量評(píng)估要素：
1、特異性
特異性簡(jiǎn)單來說就是陰性樣本的陰性檢出率，要保證這一點(diǎn)首先就需要做到與其他檢測(cè)抗體（原）無交叉感染，并且保證陰性樣本檢出的準(zhǔn)確性。
2、靈敏度
靈敏度簡(jiǎn)單來說就是陽性樣本的陽性檢出率，一方面能夠反映出試劑盒對(duì)于被檢物質(zhì)的最低檢測(cè)能力，另一方面需要保證陽性樣本檢出的準(zhǔn)確性。可通過我們自身待檢物質(zhì)的性質(zhì)進(jìn)行選擇，如果我們待檢物質(zhì)濃度量很低，可以選擇高靈敏的試劑。
3、精密性
又可稱作重復(fù)性，一般而言，對(duì)于 ELISA 試劑盒而言，板間及板內(nèi)精密性可控制在 15% 以內(nèi)。有些 ELISA 試劑盒精密性可達(dá)到 10% 以內(nèi)。
4、穩(wěn)定性
穩(wěn)定性是試劑盒必須有的基本屬性，是指試劑（盒）在有效期內(nèi)和規(guī)定條件下保持其性能的能力，一般有效期穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、以及凍融穩(wěn)定性。
5、操作簡(jiǎn)便性
同樣對(duì)于 ELISA 的操作簡(jiǎn)便程度大家也是非常關(guān)心的，操作時(shí)間以及操作步驟也是我們?cè)谶x擇試劑盒過程中需要考慮的問題。
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