血鋅濃度檢測(cè)試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
鋅是必需的微量元素之一,在胰島素和卟啉代謝中也起重要作用。
測(cè)定原理:
在pH 8.5~9.5的溶液中,Zn2+與鋅試劑生成藍(lán)色配位化合物,在620nm有最大吸收峰。
自備儀器和用品:
離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水和無水乙醇。
試劑組成和配制:
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前1天配制,加入15mL無水乙醇充分溶解,蓋緊,過夜待用。4℃保存可穩(wěn)定約1個(gè)月,如顏色變黃,則已失效。
標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1支,10 μ mol/L Zn2+標(biāo)準(zhǔn)液。4℃保存。
測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到620 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 標(biāo)準(zhǔn)液解凍:提前取出標(biāo)準(zhǔn)液,置于室溫下充分解凍后混勻。
3. 空白管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL蒸餾水,100μL試劑一,混勻;室溫,13000g,離心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL試劑二,100μL試劑三,充分混勻后13000g離心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm測(cè)定吸光度,記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)液,100 μL試劑一,混勻;室溫,13000g,離心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL試劑二,100μL試劑三,充分混勻后13000g離心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm測(cè)定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 測(cè)定管:取1.5 mL EP管,依次加入100 μL血清,200 μL試劑一,混勻;室溫,8000g,離心10min,小心吸取上清液100 μL,加入0.5 mL EP管,加入100μL試劑二,100μL試劑三,充分混勻后13000g離心取上清,吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板,620 nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
血鋅濃度計(jì)算公式:
血鋅濃度(μ mol/ L)=C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
= 10×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)液:10 μ mol/L Zn2+
注意事項(xiàng):
- 試劑三需提前一天配制,如變黃色則不能再使用。
- 加入試劑三混勻后,要在30 min內(nèi)完成該管測(cè)定。
- 最低檢出限為1μ mol/L。
血鋅濃度檢測(cè)試劑盒配方(微量法 100T/96S)
試劑一:取20 mL試劑瓶,加入20mL甲醇。
試劑二:稱0.2g氫氧化鈉溶于50mL蒸餾水 充分溶解后取21.4mL于50mL試劑瓶中,
取30mL試劑瓶,稱0.32g硼酸、0.373g氯化鉀溶于25mL蒸餾水,充分溶解后將其全部倒入上述21.4mL氫氧化鈉溶液內(nèi)混勻,取出15mL于15mL試劑瓶?jī)?nèi),即為試劑二,其余的留著以后用。
試劑三:取10 mL棕色試劑瓶,加入12mg鋅試劑
標(biāo)準(zhǔn)液:稱取1 mg氧化鋅(81.39MW),加10 μ L濃鹽酸,10 μ L蒸餾水,充分溶解;加12.267 mL蒸餾水,混勻;取EP管,加入10 μ L上述溶液,加入990 μ L蒸餾水,混勻,即10 μ mol/L Zn2+標(biāo)準(zhǔn)液。